斑点叉尾鮰铁调素成熟肽在毕赤酵母中的表达及其抑菌活性

• 作者: 宋长丰 沈彦萍 赵冬梅 陶妍
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 斑点叉尾鮰 铁调素成熟肽(mCH) 毕赤酵母 重组表达 抗菌活性
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 380-387
• 页数: 8页
• 字数: 5189字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2015.03.012

摘要

铁调素(hepcidin)是一种在动物肝脏中特异表达的碱性小分子抗菌肽,在机体免疫系统中发挥重要作用,被认为是抗生素的理想替代品.本研究根据毕赤酵母(Pichia pastoris)偏爱性密码子人工合成斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus) hepcidin成熟肽基因(mCH).通过PCR方法在mCH的5'端和3'端分别引入EcoR Ⅰ和Not Ⅰ酶切位点,扩增到的目的片段与表达载体pPIC9K连接构建重组表达载体pPIC9K-mCH后,转化至毕赤酵母GSll5细胞;以不同浓度梯度的G418筛选高拷贝转化子,1.0％甲醇、30℃、pH 6.0诱导表达72h,获得重组体mCH.结果显示,斑点叉尾鮰hepcidin成熟肽区域含25个残基,8个保守的半胱氨酸残基位于成熟肽的羧基端,表明该区域对hepcidin的抗菌活性具有重要作用.Tricine-SDS-PAGE分析显示,分泌表达的重组体mCH的分子量约为3 800 D,通过阳离子交换层析获得纯化的mCH.抑菌实验表明,重组体抗菌肽mCH对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和大肠杆菌(Escherichia coli)有抑菌活性.本研究首次实现了斑点叉尾鮰hepcidin成熟肽在毕赤酵母中的重组DNA表达,为其产业化制备提供了重要的基础资料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈彦萍		6	49	5.0	6.0