斑点叉尾鮰C型溶菌酶在毕赤酵母中的表达及其抑菌活性

• 作者: 冯亚东 崔旭 李雯 王强厚 陶妍
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 斑点叉尾鮰 C型溶菌酶 毕赤酵母 重组DNA表达 抑菌活性
• 年，卷（期）: 2017,（7）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 195-202
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017-0094

摘要

C型溶菌酶是存在于各种生物组织中的数种溶菌酶成员中的一员,是重要的细胞内免疫蛋白,具有稳定的空间结构和显著的抑菌功能,被认为是良好的食品保鲜剂和饲料添加剂.为了开发鱼类来源的C型溶菌酶,研究建立了基于毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统的斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)C型溶菌酶的制备方法.首先通过PCR获得5'和3'端分别添加Xho I和Xba I酶切位点的编码斑点叉尾鮰C型溶菌酶的cDNA(cflyC),其编码由127个氨基酸残基组成的多肽;将该cflyC与表达载体pPICZαA连接以构建重组表达载体pPICZαA-cflyC;转化至毕赤酵母X-33后,通过不同浓度的博来霉素和对酵母基因组DNA的PCR鉴定,筛选得到高拷贝的酵母转化子;经0.5%甲醇诱导,在pH6.0、29℃、250 r/min下培养144 h,得到的表达产物经固化金属离子亲和层析(IMAC)纯化,得到重组蛋白;经Tricine-SDS-PAGE分析,表明重组蛋白的分子量为15.1 kD;进一步通过MALDI-TOF-TOF质谱鉴定,证明该重组蛋白为预期的重组cflyC.通过福林酚法测得重组cflyC的表达量为2.75 mg/L.琼脂糖凝胶扩散法和酶活力测定证明,重组cflyC对枯草芽孢杆菌具有抑菌活性.本研究首次实现了斑点叉尾鮰C型溶菌酶在毕赤酵母中的重组DNA表达,为其大规模制备奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陶妍	上海海洋大学食品学院上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心	34	379	6.0	19.0
2	王强厚	上海海洋大学食品学院上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心	3	9	2.0	3.0
3	崔旭	上海海洋大学食品学院上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心	3	9	2.0	3.0
4	冯亚东	上海海洋大学食品学院上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心	1	5	1.0	1.0
5	李雯	上海海洋大学食品学院上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心	2	5	1.0	2.0