H1N1亚型猪流感病毒 HA1基因原核表达及鉴定

• 作者: 于海 刘晓敏 刘芹防 单同领 宫晓倩 李泽君 汪琪 汪秀会 滕巧泱 王林 童光志 阮宝阳 陈鸿军
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: HA1基因 禽源H1N1亚型猪流感病毒 原核表达 可溶性 抗原性
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 病毒
• 页码范围: 14-18
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.5
• 字数: 2881字
• 语种: 中文

摘要

本研究利用RT-PCR技术扩增禽源H1N1亚型猪流感病毒（Swine influenza virus，SIV）的HA1基因片段，将其连接至pCold-TF载体上，菌液鉴定为阳性的克隆经测序验证正确后，提取质粒转化至高表达的表达宿主菌BL21（DE3）中，经IPTG诱导并大量表达目的蛋白。表达产物经过纯化及SDS-PAGE电泳分析，表明重组蛋白以可溶性形式在上清中大量表达，大小约90 kDa，且在15℃、0.8mmol/L IPTG条件下诱导24 h 表达效果最好。通过Ni 柱纯化后，经Western blot分析表明重组表达的蛋白能与禽源H1N1亚型 SIV阳性血清发生特异性反应，具有较好的反应原性。