巨核酸酶I-SceI转基因元件的构建及其在斑马鱼中转基因效率的评估

• 作者: 余嘉欣 叶星 孙成飞 田园园 董浚键
• 来源期刊: 上海海洋大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 巨核酸酶 I-SceI 斑马鱼 转基因
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 水生生物技术
• 页码范围: 650-655
• 分类号: S917
• 语种: 中文

摘要

巨核酸酶I-SceI是由酿酒酵母线粒体中核糖体大亚基上的Ⅰ型内含子编码的一种核酸内切酶,近年已被应用于转基因研究中.I-SceI介导的转基因大多是将I-SceI蛋白和带有其识别位点的质粒共注射于动物的受精卵,但注射酶蛋白前期处理耗时长且工作量大,直接用I-SceI的mRNA代替蛋白进行注射更为简捷.本研究应用I-SceI mRNA介导荧光蛋白基因在斑马鱼中的转植,进一步了解其转基因效率.首先设计合成带有巨核酸酶I-SceI编码序列的辅助质粒(pCS2-I-SceI),并分别构建了带有巨核酸酶I-SceI识别位点、EF1α启动子和荧光蛋白基因(eGFP/RFP)编码序列的供体质粒pI-SceI-EF1α-eGFP/RFP.辅助质粒pCS2-I-SceI体外转录成mRNA,以50 ng/μL供体质粒和100 ng/μL的I-SceI巨核酸酶mRNA共注射到斑马鱼(Danio rerio)受精卵中,注射后48 h的斑马鱼eGFP的平均荧光表达率可达75.86％.在斑马鱼的头部、躯干到尾部均可观察到荧光蛋白的表达,且随着胚胎发育,荧光信号逐渐增强.结果表明I-SceI系统在斑马鱼中可介导较高效率的转植,具有在经济鱼类转基因研究中应用的潜力.