猪圆环病毒2型ORF1、ORF2和ORF3原核表达和多克隆抗体的制备

• 作者: 杜谦 王莉莉 童德文 陈禹 霍瑞超 黄勇
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: PCV2 ORF1 ORF2 ORF3 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 686-691
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文

摘要

猪圆环病毒2型(porcine Circovirus type 2,PCV2)感染给养猪业造成巨大的经济损失,而PCV2ORF1、ORF2和ORF3与PCV2的复制、免疫原性及致病机理密切相关.本研究制备PCV2ORF1、ORF2和ORF3多克隆抗体,为进一步研究PCV2ORF1、ORF2和ORF3的功能提供材料.依据PCV2全基因组序列,分别设计针对PCV2ORF1、ORF2和ORF3编码基因的特异性引物,PCR扩增后,克隆入原核表达载体pET-32a的BamHⅠ/NcoⅠ和HindⅢ位点之间,经PCR、双酶切和测序鉴定正确的重组原核表达载体分别命名为pET-ORF1、pET-ORF2和pET-ORF3.重组质粒分别转化E.coli BL21菌株,1 mmol/L IPTG诱导表达ORF1、ORF2和ORF3重组蛋白,SDS-PAGE测定结果表明其相对分子质量分别约为52 000、39 000和29 000.大量诱导重组蛋白表达后,回收目的蛋白条带、匀浆后免疫新西兰大白兔,制备兔抗PCV2ORF1、ORF2和ORF3重组蛋白血清.兔抗血清纯化后,Western blot检测抗血清与重组蛋白的特异性结合情况及其效价,证明所制备多克隆抗体均具有较强的特异性,效价均高于1∶10 000.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	童德文	西北农林科技大学动物医学学院	91	938	15.0	27.0
2	黄勇	西北农林科技大学动物医学学院	14	67	5.0	7.0
3	杜谦	西北农林科技大学动物医学学院	5	41	4.0	5.0
4	陈禹	西北农林科技大学动物医学学院	1	5	1.0	1.0
5	霍瑞超	西北农林科技大学动物医学学院	1	5	1.0	1.0
6	王莉莉	西北农林科技大学动物医学学院	1	5	1.0	1.0