基于序列特异扩增区域标记的栗疫菌巢式PCR检测技术

• 作者: 刘洋 张静 朱天辉 郑磊 麻文建
• 来源期刊: 浙江大学学报（农业与生命科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 粟疫菌 随机扩增多态性DNA技术 序列特异扩增区域 巢式PCR 分子检测
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 生物科学与技术
• 页码范围: 25-33
• 页数: 9页
• 分类号: Q939.95|S432.44
• 字数: 7140字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9209.2014.06.261

摘要

为建立栗疫菌(Cryphonectria parasitica)快速、准确的检测技术,利用随机扩增多态性DNA技术(random amplified polymorphic DNA,RAPD)对不同来源地的栗疫菌和其他真菌分离物进行PCR扩增,筛选出栗疫菌的RAPD特异片段SCQ494.将特异RAPD片段SCQ494进行分离、回收,与载体pMD@19-T载体连接,转化至大肠埃希菌进行培养,对目标片段克隆测序.根据测序结果,用Primer 5.0软件设计了序列特异扩增区域(sequence characterized amplified region,SCAR)引物CQ1/CQ2和巢式PCR引物CR1/CR2.利用引物CQ1/CQ2通过常规PCR对不同来源地供试栗疫菌可扩增出1条约1 420 bp的条带,对其他供试菌株DNA的PCR产物均无此条带,检测灵敏度为3 pg/μL的基因组DNA;而以引物CQ1/CQ2为外圈引物和引物CR1/CR2为内圈引物进行的巢式PCR可从栗疫菌基因组DNA中扩增出1条大小约875 bp的条带,灵敏度达到30 fg/tμL,是常规PCR的1000倍.验证实验表明巢式PCR可以从发病程度不同的栗树枝干和在自然感染的栗树枝条中检测出栗疫菌.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱天辉	四川农业大学林学院	167	1369	19.0	26.0
2	刘洋	四川农业大学林学院	39	578	14.0	23.0
3	张静	四川农业大学林学院	46	354	11.0	17.0
4	郑磊	四川农业大学林学院	10	39	4.0	5.0
5	麻文建	四川农业大学林学院	9	18	3.0	3.0