多重实时荧光PCR检测禽网状内皮组织增生症病毒方法的建立以及初步应用

• 作者: 秦爱建 缪佶 邵红霞 钱琨 鲍衍清
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 禽网状内皮组织增生症病毒 鸡胚成纤维细胞 实时荧光PCR 复制
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 页码范围: 1-8
• 页数: 8页
• 分类号: S852.659.3
• 字数: 5184字
• 语种: 中文

摘要

本文建立了一种快速、灵敏、特异性强的禽网状内皮组织增生症病毒（Reticuloendotheliosis virus，REV）检测方法，并对REV在鸡胚成纤维细胞（chick embryo fibroblast，CEF）上的增殖动态规律进行研究。分别针对gag、env以及LTR基因的保守序列设计3对引物，利用重组质粒作为模板，绘制3种不同基因的标准曲线。检测结果显示，本研究建立了多重实时荧光PCR检测方法，所制备的标准品模板在108~101copies范围内与Ct值之间呈现良好的线性关系，且最低检出量为101copies。REV感染CEF后gag、env、LTR基因的拷贝数均先减少后增多。通过实时荧光PCR技术与间接免疫荧光方法检测，发现REV在CEF上复制的初始阶段呈现病毒适应过程，此后病毒大量复制，表现出明显的增长趋势。该研究不仅为REV的诊断技术提供了一种新的方法，同时也为深入研究REV的感染机制和致病机理奠定了基础。