中华绒螯蟹几丁质酶基因HXchit全长cDNA克隆及其在蜕皮过程中的表达分析

• 作者: 刘启彬 姚琴琴 成永旭 施秋燕 杨志刚 王瑶 郭子好
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 中华绒螯蟹 几丁质酶 HXchit 基因克隆 表达分析 蜕皮
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 185-195
• 页数: 11页
• 分类号: S972.1
• 字数: 8303字
• 语种: 中文

摘要

采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和cDNA末端快速扩增(RACE)技术,依据锯缘青蟹(Scylla serrata)几丁质酶基因的保守区设计引物,克隆了中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)几丁质酶基因(HXchit)全长,并通过荧光定量PCR(qRT-PCR)技术研究了HXchit在中华绒螯蟹的同一蜕皮阶段不同组织、不同蜕皮阶段主要几个组织的表达情况.结果显示,HXchit基因cDNA全长2 042 bp (GenBank accession no.KJ513466),包括5'非编码区(5'UTR) 35 bp,3 '非编码区(3'UTR) 537 bp,开放阅读框(ORF)1 470 bp,编码490个氨基酸,预测分子量和理论等电点分别为53.44 kD 和4.41.经BLASTN和BLASTX分析,HXchit基因的氨基酸序列与锯缘青蟹几丁质酶的氨基酸序列同源性最高,相似性为75％;经聚类分析,HXchit氨基酸序列与锯缘青蟹几丁质酶聚为一支.qRT-PCR结果显示,HXchit在所检测的组织中均有表达,各组织的表达量依次为肝胰腺＞表皮＞肌肉＞胃＞鳃＞胸神经节＞肠＞心脏＞脑神经节.对不同蜕皮周期的中华绒螫蟹分析显示,肝胰腺中HXchit表达水平在D期最高,并与E期、AB期及C期呈显著性差异(P＜0.05);表皮中HXchit在E期、AB期、C期和D期的表达水平呈逐渐升高的趋势,D期表达量达到最高且与E期、AB期、C期呈显著性差异(P＜0.05);肌肉中HXchit表达量在C期最高,但各蜕皮时期的表达量之间差异不显著(P＞0.05).结果表明HXchit 是一种在中华绒螯蟹肝胰腺中大量表达的酸性几丁质酶,推测其在蜕皮周期中对几丁质类食物的消化或内源性几丁质的降解起到了重要作用,本研究旨在为进一步探索几丁质酶的准确生理功能和调控机制奠定分子基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨志刚	上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室	39	199	9.0	12.0
2	王瑶	上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室	11	66	4.0	8.0
3	成永旭	上海海洋大学农业部	75	457	11.0	17.0
4	施秋燕	上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室	6	28	3.0	5.0
5	姚琴琴	上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室	7	69	5.0	7.0
6	郭子好	上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室	8	79	5.0	8.0
7	刘启彬	上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室	2	20	2.0	2.0