双重RT-PCR快速检测H7N9流感病毒方法的建立

• 作者: 于美芳 侯广宇 刘朔 孙文博 彭程 李金平 杜翔 王素春 蒋文明
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 流感病毒 H7N9 双重RT-PCR
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 技术支撑
• 页码范围: 65-68,81
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65
• 字数: 2421字
• 语种: 中文

摘要

为建立简便快速检测H7N9亚型流感病毒的方法,根椐GenBank中H7亚型流感病毒的HA基因序列和N9亚型流感病毒的NA基因序列,设计2对特异性引物,在建立H7亚型和N9亚型单项RT-PCR的基础上,优化双重RT-PCR反应条件,建立同时检测H7亚型和N9亚型的双重RT-PCR.对H7N9亚型流感病毒核酸模板进行双重RT-PCR扩增,结果可同时扩增HA基因263bp、NA基因520 bp的特异性片段,而对其他常见亚型的流感病毒的RT-PCR扩增结果均为阴性.敏感性试验结果表明,该双重RT-PCR方法的检测下限为3 pg的H7N9病毒模板.利用该双重RT-PCR方法对30份临床样品进行H7N9病毒进行检测,与病毒分离方法进行对比,结果显示,两者的符合率为100％.结果表明建立的双重RT-PCR检测方法,具有特异、快速、敏感、准确的特点,可用于H7N9流感病毒的同时检测和鉴别诊断,为H7N9亚型流感的有效防控提供技术支撑.