转基因牛乳中重组人乳铁蛋白中试纯化工艺的建立及其活性分析

• 作者: 付明波 孟如杰 李宁 汤波 王建武 王慧敏 赵建敏 陈敏
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 工学
• 关键词: 重组人乳铁蛋白 转基因牛乳 离子交换色谱法 铁结合活性 抑菌活性
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 182-189
• 分类号: Q819|TS252.41
• 语种: 中文

摘要

目的 建立转基因牛乳中重组人乳铁蛋白(recombinant human lactoferrin,rhLF)的中试纯化工艺,并分析纯化的rhLF的活性.方法 以含rhLF的转基因牛乳为原料,通过陶瓷膜分离技术除菌,一步阳离子交换层析,非离子型去污剂与金属络合剂去除内毒素,以及超滤浓缩脱盐,冷冻干燥制备重组蛋白纯品等步骤纯化rhLF,采用SDS-PAGE、凝胶过滤色谱(SEC-HPLC)法和反相色谱(RP-HPLC)法分析rhLF的纯度;ELISA法检测rhLF的含量;鲎试剂法检测rhLF的内毒素含量;圆二色谱技术分析rhLF的二级结构;并检测rhLF的铁结合能力和抑菌活性.结果 纯化的rhLF的平均纯度可达96％,内毒素含量小于0.5EU/mg,整个工艺回收率达75％,且具有与天然人乳铁蛋白(human lactoferrin,hLF)相近的二级结构及正常的铁结合能力和抑菌活性.结论 建立的牛乳中rhLF的中试纯化工艺简便高效,适用于rhLF的规模化生产.