小鼠肾脏特异性 miR-29c 表达载体的构建与鉴定

• 作者: 何秀云 孔祥瑞 樊文梅 王新颖 石炳毅 肖漓 许晓光 韩永 马锡慧 高钰 魏玉香 黄海燕
• 来源期刊: 解放军医药杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 转录启动子 肾移植 微RNAs 钙黏着糖蛋白类
• 年，卷（期）: 2015,（7）
• 所属期刊栏目: 肾移植专栏
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: R394.3|R-332
• 字数: 4548字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-140X.2015.07.001

摘要

目的：构建载体实现 miR-29c 在肾脏组织的特异性表达。方法分别以质粒 pcDNA 3.1(+)和小鼠基因组 DNA 为模板，扩增 CMV 增强子序列和肾脏特异性钙黏着素蛋白 KSP-cadherin 启动子序列；将连接成的单一片段酶切后替换 pCAGGS 载体上的 CAG 启动子构成目的载体 pCMV-KSP。将 GFP 编码区序列或小鼠 miR-29c 前体及两侧序列克隆到构建的载体上观察转染后目的基因的表达。结果从相应的模板上扩增出的序列经验证后连接到了 pCAGGS 载体上，转染细胞后在荧光显微镜下观察到 KSP 启动子调控下的 GFP 在 MDCK 中表达，而在 NIH-3T3细胞中仅见微弱荧光。 pCMV-KSP-pCAGGS-miR-29c 载体较对照载体在转染人胚肾293T 细胞24 h 后，成熟 miR-29c 的表达显著升高，其靶基因 bcl-2表达相应降低。结论构建 KSP 启动子调控 miR-29c 表达的载体，为构建肾脏特异性表达 miR-29c 转基因小鼠，进一步研究 miR-29c 在肾移植后的各种病理过程中的作用奠定了基础。