重组毛囊特异性表达载体的构建与验证

• 作者: 于永生 朴庆林 罗晓彤 金海国
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 角蛋白关联蛋白6-1 毛囊特异表达载体 体外验证
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 动物与饲料科学
• 页码范围: 3615-3617
• 分类号: S826.9+1
• 字数: 2433字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2011.06.169

摘要

[目的]构建毛囊特异性表达绵羊毛角蛋白Ⅱ型中间丝9(KIF Ⅱ-9)cDNA的毛囊特异性表达载体,并证明其表达的有效性.[方法]根据绵羊毛角蛋白关联蛋白6.1(KAP6.1)基因已知DNA序列设计合成2个特异性引物,以绵羊基因组DNA为模板,通过PcR扩增得到KAP6-15'调控序列,然后与毛角蛋白Ⅱ型中间丝基因(KIF Ⅱ-9)CDNA、去除CMY启动子的表达载体pcDNA3.1连接构成皮肤特异性表达载体pcDNA3.1-KK,新生小鼠皮下注射该重组载体证明其表达有效性.[结果]PCR扩增出1 042 bp的特异性片段,DNA测序结果证明,该克隆片段与KAP6-1 5'端调控区序列相比具有极高的一致性;构建的毛囊特异性表达载体PCDNA3.1-KK,皮下注射新生小鼠,皮肤内KIF Ⅱ-9得到转录.[结论]该试验构建的载体PCDNA3.1-KK具有表达特异性.