CRISPR/Cas系统干扰HPV16 E6基因对SiHa细胞增殖和凋亡影响

• 作者: 叶望莲 夏薇 朱承义 项涛 魏波
• 来源期刊: 中华肿瘤防治杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人乳头瘤病毒16 E6 规律间隔的短回文重复序列 宫颈肿瘤 p53 SiHa
• 年，卷（期）: 2015,（18）
• 所属期刊栏目: 实验研究/论著
• 页码范围: 1445-1450
• 分类号: R737.33
• 语种: 中文

摘要

目的 研究人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV) 16型的E6病毒癌基因被特异性靶向HPV16-E6位点成簇的、规律间隔的短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)定点敲除后,宫颈癌细胞系SiHa在细胞凋亡和增殖方面的变化.方法 设计靶向HPV16 E6基因的向导RNA(guide RNA,gRNA),脂质体介导gRNA质粒和Cas9质粒对HPV16阳性人宫颈癌细胞系SiHa和HPV16阴性的正常人胚肾上皮HEK293细胞转染.流式细胞术检测SiHa和HEK293细胞转染前后细胞在凋亡率方面的变化;CCK8法检测转染前后两种细胞的增殖能力变化;蛋白质印迹法检测E6基因敲除后,SiHa细胞中E6蛋白和p53蛋白的表达水平.结果 将靶向HPV16 E6基因的gRNA质粒和Cas9质粒共同转染SiHa细胞48 h后,E6-gRNA/Cas9组SiHa细胞凋亡率为25.6％,与未转染gRNA和Cas9质粒的SiHa细胞空白组(2％)以及只转染等量Cas9质粒的Cas9组(3％)相比明显上升,差异有统计学意义,F=58.500,P＜0.001;而只转染等量Cas9质粒的Cas9组和空白组SiHa细胞的凋亡率差异无统计学意义,P＞0.05.CCK8实验表明,转染72 h后,与空白组相比,E6-gRNA/Cas9组SiHa细胞增殖抑制率为31.3％,细胞增殖抑制明显,P=0.008;转染96 h后,与空白组相比,E6-gRNA/Cas9组细胞增殖抑制率为30.6％,P=0.002;而不表达HPV16 E6基因的HEK293细胞的增殖能力未被抑制,3组细胞之间增殖能力相比差异无统计学意义,F=0.219,P=0.810.转染48 h后,与空白组相比,SiHa细胞E6蛋白表达下降,E6蛋白表达抑制率为-45.24％,三组之间E6蛋白表达量差异有统计学意义,F=30.392,P＜0.001;与空白组相比,p53蛋白表达上调+250.08％,3组p53蛋白表达量差异有统计学意义,F=50.530,P＜0.001.结论 应用CRISPR特异性地抑制HPV16 E6基因表达可以诱导SiHa细胞凋亡,抑制SiHa细胞增殖,下调E6蛋白并且上调p53蛋白表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	魏波	华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科	5	0	0.0	0.0
2	夏薇	华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科	10	23	3.0	4.0
3	项涛	华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科	9	9	3.0	3.0
4	朱承义	东风公司中心医院妇产科	1	0	0.0	0.0