BRAF 野生型及 BRAFV600 E 突变型的黑色素瘤细胞中 Mps1基因对 BRAF WT／MEK／ERK 通路的影响

• 作者: 刘峰 刘静 宋彬 崔鹤洋 师如意 张玲 杨斌 毕炀辉 王娟 王芳 贺婵婷 贾志武 赵振祥
• 来源期刊: 中华病理学杂志
• 关键词: 黑色素瘤 转染 印迹法,蛋白质
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 274-277
• 页数: 4页
• 字数: 3541字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0529-5807.2015.04.014

摘要

目的：研究野生型BRAF及突变型BRAFV600E背景下Mps1激酶对BRAFWT／MEK／ERK通路的影响。方法（1）在BRAF野生型背景的黑色素瘤细胞中单独或联合转染pBabe－puro－GST－BRAF－WT／pBabe－puro－GST－BRAFV600E、pBabe－puro－GFP－Mps1－WT 及空载体，应用 Western blot方法来检测 Mps1及 p－ERK 表达水平。（2）用 pSUPER－Mps1反转录病毒感染 BRAF 野生型及BRAFV600E突变型背景黑色素瘤细胞，敲低内源性Mps1，Western blot法检测Mps1及p－ERK表达水平。（3）在BRAFV600E突变型背景的黑色素瘤细胞中转染pBabe－puro－GFP－Mps1，Western blot法检测Mps1及p－ERK表达水平。结果（1）在BRAF野生型背景的黑色素瘤细胞中转染pBabe－puro－GST－BRAF－WT及pBabe－puro－GFP－Mps1－WT，与未处理组及转染空载体组相比，p－ERK水平显著降低（ P＜0．01）；在BRAF野生型背景的黑色素瘤细胞中转染pBabe－puro－GST－BRAFV600E及pBabe－puro－GFP－Mps1－WT，与未处理组及转染空载体组相比，p－ERK表达水平未发生明显变化。（2）在BRAF野生型背景的黑色素瘤细胞中敲低内源性Mps1后，与对照组相比p－ERK含量增多；而在BRAFV600E突变型黑色素瘤细胞中敲低内源性Mps1后，与对照组相比p－ERK含量未发生明显变化。（3）转染Mps1的BRAFV600E突变型细胞中 p－ERK 水平较对照组及空载体组没有发生显著变化。结论Mps1激酶和BRAFWT／MEK／ERK通路之间存在一条自动调节的负反馈回路，而癌基因BRAFV600E表现出对该负反馈回路的抵抗作用。