一种高效的苹果褪绿叶斑病毒TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法

• 作者: 孙建设 王娜 秦子禹 邵建柱
• 来源期刊: 植物保护学报
• 关键词: 苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV) TaqMan探针 实时荧光定量RT-PCR
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 551-556
• 语种: 中文
• DOI: 10.13802/j.cnki.zwbhxb.2015.04.011

摘要

为建立一种检测苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)的TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR方法,根据ACLSV外壳蛋白基因(coat protein,cp)保守序列设计了特异性引物和TaqMan探针,以构建的ACLSV-cp重组质粒为阳性标准品绘制标准曲线,并对该方法的特异性、灵敏性、重复性进行检验.结果显示,以ACLSV-cp重组质粒为标准品建立的标准曲线相关系数达0.999,扩增效率为103.7％;建立的TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR方法特异性好,与苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)、苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus,ASPV)、苹果锈果类病毒(Apple scar skin viroid,ASSVd)均无交叉反应;灵敏度为100拷贝/μL,比常规RT-PCR高100倍;批内和批间变异系数均小于0.84％.表明TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR方法具有特异性强、灵敏性高、重复性好的优点,适用于实际样品中ACLSV的快速准确检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙建设	河北农业大学园艺学院	86	1569	21.0	37.0
2	邵建柱	河北农业大学园艺学院	60	510	12.0	19.0