肠道病毒71型类病毒颗粒在汉逊酵母中的表达及其免疫原性

• 作者: 张盼 徐颖之 方玉松 李国顺 王凤伟 郭林 陈磊 顾美荣 魏文进
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肠道病毒71型 类病毒颗粒 汉逊酵母 免疫原性
• 年，卷（期）: 2015,（9）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 906-911
• 分类号: R373.2|Q786
• 语种: 中文

摘要

目的 于汉逊酵母中表达肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)类病毒颗粒(virus-like particle,VLP),并分析其免疫原性.方法 将鉴定正确的重组质粒pMV-P1-3CD转化汉逊酵母AU0501,经筛选获得稳定整合P1和3CD基因的重组菌株pMV-P1-3CD/AU.30 L发酵罐培养重组菌株,发酵产物纯化后进行SDS-PAGE、Western blot、HPLC检测、电镜分析及动态光散射分析检测.采用不同方法制备EV71疫苗,分别免疫小鼠和家兔,检测动物血清中和抗体几何平均滴度(GMT),评价其免疫原性及不同佐剂对疫苗免疫原性的影响.结果 重组菌株pMV-P1-3CD/AU表达产物及疫苗原液的SDS-PAGE分析显示,于相对分子质量26 000、33 000和35 000处均可见VP3、VP1和VP0蛋白条带,且相对分子质量33 000的蛋白可与EV71-VP1单克隆抗体发生特异性结合;疫苗原液的纯度达99％以上;电镜观察可见30 nm的VLP,颗粒均一度较好;小鼠血清GMT最高可达1 536,家兔血清GMT最高可达586,磷酸铝佐剂及氢氧化铝佐剂均可明显提高小鼠血清GMT.结论 于汉逊酵母中成功实现EV71的P1和3CD基因的共表达,可形成EV71 VLP,且具有良好的免疫原性,为今后EV71 VLP疫苗的研制提供了实验依据.