TaqMan-MGB探针实时荧光定量-聚合酶链反应检测肺炎支原体方法的建立

• 作者: 刘立雍 张建中 赵飞 陶晓霞 顾一心
• 来源期刊: 疾病监测
• 学科: 医学
• 关键词: 肺炎支原体 实时荧光定量-聚合酶链反应 TaqMan-MGB探针
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 236-239
• 分类号: R375+2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2015.03.017

摘要

目的 建立敏感、特异的TaqMan-MGB探针实时荧光定量-聚合酶链反应(real-time PCR)快速检测方法,为临床标本中肺炎支原体快速检测提供技术支持.方法 选取肺炎支原体重复序列RepMP23中保守区域设计、合成特异性扩增引物和TaqMan-MGB探针,建立并优化real-time PCR检测方法.对优化后的方法使用标准浓度核酸进行扩增效率、灵敏度及特异度评价,并与已报道的肺炎支原体荧光PCR方法进行比较.结果 本研究建立的TaqMan-MGB探针荧光PCR方法对肺炎支原体的检测限为0.2 cfu,比普通TaqMan real-time PCR检测限(3～5 cfu)提高了一个数量级.其检测标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(R2=0.999).用该方法扩增23种呼吸道常见病原菌染色体及人类染色体,结果均为阴性,特异度为100％.结论 TaqMan-MGB探针real-time PCR方法可快速、灵敏、特异地检测肺炎支原体,有很好的应用前景与价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张建中	中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室	140	649	13.0	18.0
2	顾一心	中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室	9	14	2.0	3.0
3	赵飞	中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室	36	130	7.0	10.0
4	陶晓霞	中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室	14	31	4.0	5.0
5	刘立雍	中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室	4	2	1.0	1.0