多西环素多克隆抗体的制备及鉴定

• 作者: 刘霞 夏圣 尹蕾 张苗苗 杜凤移 王军 王荟 禚娅 蒋砚秋
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 多西环素 多克隆抗体 偶联 鉴定
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 98-102
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11
• 字数: 4267字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13312/j.issn.1671-7783.y140079

摘要

目的:采用人工偶联方法构建多西环素完全抗原,制备多克隆抗体.方法:分别采用直接偶联法、甲醛—步法、重氮法+混合酸酐法和重氮法+碳二亚胺法等4种方法将多西环素与牛血清白蛋白(bull serum albumin,BSA)或鸡卵清蛋白(ovalbumin,OVA)分别偶联,构建人工完全抗原.选择最好偶联效果制备的抗原免疫BALB/c小鼠,通过直接ELISA法检测多克隆抗体效价,竞争抑制ELISA法分析其灵敏性及特异性.结果:重氮法+碳二亚胺法偶联的多西环素人工完全抗原效果最好,其与BSA的偶联比为8.37∶1,与OVA的偶联比为4.92∶1.采用该方法偶联的抗原免疫小鼠获得的多克隆抗体效价在1∶8000以上;该抗体对多西环素的半数抑制浓度(IC50)为98.89 ～ 120.32 μg/L,与其他四环素类药物的交叉反应性较低.结论:重氮法+碳二亚胺法的偶联效率最高,获得的多西环素多克隆抗体效价较高,特异性和灵敏度均较理想.