半滑舌鳎vasa调控区的克隆、表达载体构建及其驱动活性检测

• 作者: 刘洋 李亚亚 林帆 王娜 邵长伟 陈松林 黄进强
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 半滑舌鳎 vasa启动子 显微注射 绿色荧光蛋白 转基因 驱动活性
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1-8
• 页数: 8页
• 分类号: S917
• 字数: 5389字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1118.2015.00057

摘要

为研究半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis) vasa(Csvasa)基因调控区的功能,在已克隆的Csvasa 基因编码序列的基础上,采用基因组步移和PCR扩增的方法克隆得到Csvasa调控区,通过生物信息学方法分析vasa基因5′区,并构建了含Csvasa 基因调控区的绿色荧光蛋白(GFP)表达载体(pCsvasa-GFP-T),进一步通过显微注射技术初步验证调控区的驱动活性。结果表明,通过基因组步移和PCR扩增获得Csvasa 5′区5166 bp和3′区1655 bp,利用在线生物信息学软件对5′区序列进行分析,发现在转录起始点上游26 b p处存在保守的TATA框,以及潜在的转录因子结合点如 SRY、Oct-1、Sox-5、CREB、GATA、AP-1、C/EBP、Sp-1、c-Myc、HNF、NKX2-5、V-Myb 等。通过显微注射技术,将所构建的 pCsvasa-GFP-T 鳉表达载体注射于青(Oryzias latipes)受精卵并进行培养观测,发现Csvasa调控区能够驱动GFP在青鳉胚胎内表达,荧光表达率为81%。将有荧光的胚胎培养为成鱼,检测外源基因的整合率为11.5%。这些结果为进一步研究半滑舌鳎原始生殖细胞(PGCs)的标记、追踪和操作研究以及半滑舌鳎的性别控制等奠定了基础。