中温α-淀粉酶基因在枯草芽孢杆菌中的整合及高效表达

• 作者: 杨建国 汪兵 温赛 王凤寰
• 来源期刊: 北京化工大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 中温α-淀粉酶 枯草芽孢杆菌 染色体整合
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 生物技术与环境工程
• 页码范围: 78-82
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

从中温α-淀粉酶生产菌株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)264中克隆得到中温α-淀粉酶基因(amyL)并构建了重组表达质粒pAX01-amyL.该质粒转化枯草芽孢杆菌264后利用同源重组机制将由木糖操纵子引导的amyL表达盒整合入枯草芽孢杆菌染色体的lacA位点,以增加中温α-淀粉酶基因的拷贝数.经淀粉平板产酶初筛及Southernblot鉴定,成功分离获得了可高效分泌表达中温α-淀粉酶的基因工程菌ZHWY.该菌株在摇瓶发酵75 h后α-淀粉酶酶活可达到730 U/mL,比酶活为156 U/mg总蛋白,与原始菌株264相比提高了70％,且继代过程中表达水平稳定.在5L发酵罐中,枯草芽孢杆菌ZHWY发酵所产中温α-淀粉酶酶活最高达到1450 U/mL,具有良好的工业应用前景.