慢病毒介导的shRNA靶向干扰I2PP2A胃癌稳定细胞株的建立

• 作者: 师海蓉 李长雷 邱文洪 陈莹
• 来源期刊: 中国癌症杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 蛋白磷酸酶2A抑制剂-2 胃癌 慢病毒 稳定细胞株
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 352-359
• 页数: 8页
• 分类号: R735.2
• 字数: 4543字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-3969.2015.05.006

摘要

背景与目的：蛋白磷酸酶2A抑制剂-2(inhibitor 2 of protein phosphatase 2A，I2PP2A)在包括胃癌的多种肿瘤中过度表达，提示其可能在胃癌的发生中发挥重要作用。为进一步探讨I2PP2A的功能及其在胃癌发生中的作用，建立稳定抑制I2PP2A基因表达的人胃癌BGC823细胞株。方法：筛选出I2PP2A基因的RNA干扰(RNA interference，RNAi)有效靶序列，合成靶序列的Oligo DNA并构建pGLV2_shRNA_I2PP2A慢病毒载体，酶切和测序鉴定正确后，经病毒包装，感染BGC823细胞，经嘌呤霉素筛选稳定表达细胞株，通过实时定量PCR(real-time PCR，RT-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)鉴定I2PP2A的表达。结果：重组慢病毒质粒经测序鉴定正确；RT-PCR和Western blot证实干扰I2PP2A后，BGC823细胞株中I2PP2A表达水平明显降低，抑制率约为90%。结论：成功构建了I2PP2A shRNA慢病毒表达载体，建立了稳定抑制I2PP2A基因表达的人胃癌BGC823细胞株，为进一步研究I2PP2A在胃癌发生中的作用提供了可靠的细胞模型。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李长雷	江汉大学医学院免疫学教研室	14	41	4.0	6.0
2	师海蓉	江汉大学医学院病理学与病理生理学教研室	17	37	4.0	5.0
3	邱文洪	江汉大学医学院实验动物中心	31	133	7.0	11.0
4	陈莹	江汉大学医学院病理学与病理生理学教研室	36	71	5.0	6.0