山羊血管紧张素转换酶2基因的克隆表达与生物信息学分析

• 作者: 张源淑 权素玉 杨维维 荣超 许媛媛
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 山羊 血管紧张素转换酶2 基因克隆 生物信息学 表达
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 120-126
• 分类号: S852.23
• 语种: 中文
• DOI: 10.7685/j.issn.1000-2030.2015.01.018

摘要

[目的]血管紧张素转换酶2(ACE2)是RAS系统的关键调控酶,在动物上的研究较少,本试验研究了山羊ACE2的相关理化性质和功能.[方法]利用同源克隆及RT-PCR技术,根据牛的ACE2基因mRNA序列设计引物,从山羊肾脏组织中扩增出ACE2基因编码区的特异性片段,TA克隆到pMD19-T载体并转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,对生长出的单菌落进行验证后测序分析.根据测序分析结果设计引物,经PCR扩增和酶切连接,构建原核表达载体pET-28a-ACE2,经过验证后转化大肠杆菌BL21(DE3)并用IPTG诱导表达ACE2蛋白.[结果]山羊ACE2基因cDNA编码区共包括2 415个核苷酸,编码804个氨基酸残基.同源性比对发现,山羊ACE2基因核苷酸序列同源性与绵羊ACE2最高,为99％,与斑马鱼最低,仅为60％.遗传进化分析也表明该ACE2基因与绵羊的遗传距离最近,与斑马鱼处在两个不同的分支上.蛋白结构及理化性质分析预测该山羊ACE2蛋白属于稳定型蛋白,蛋白信号肽序列位于第1氨基酸(aa) ～18氨基酸(aa)之间,蛋白跨膜螺旋预测为Ⅰ型跨膜蛋白.成功构建山羊ACE2蛋白胞外部分(19～738 aa)表达载体,表达出的蛋白相对分子质量约为90× 103,主要以包涵体的形式在BL21 (DE3)中表达.[结论]本试验首次成功克隆了山羊ACE2基因编码区(基因序列号:KF921008.1),并对其蛋白结构及理化性质进行了初步预测,同时在大肠杆菌中高效表达了其胞外区蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张源淑	南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室	99	589	13.0	18.0
2	许媛媛	南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室	7	9	2.0	3.0
3	权素玉	南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室	5	21	3.0	4.0
4	杨维维	南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室	5	37	4.0	5.0
5	荣超	南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室	5	21	4.0	4.0