慢病毒载体介导的 RNA干扰对 HDAC2基因表达的影响

• 作者: 刘燕青 娄方方 孔维莹 黄健 黄韻祝
• 来源期刊: 贵阳医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 组蛋白去乙酰化酶2 RNA干扰 肝癌HepG2细胞 慢病毒载体 pLKO.1载体
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 581-587
• 页数: 7页
• 分类号: R735.7
• 字数: 5608字
• 语种: 中文

摘要

目的：构建组蛋白去乙酰化酶2（ HDAC2）基因的慢病毒表达载体，研究HDAC2基因在肝癌HepG2细胞中的表达。方法：将前期构建并鉴定正确的3条重组表达质粒pLKO.1-HDAC2-shRNA 1组、2组、3组及1条阴性对照pLKO.1-HDAC2-shRNAneg和空载体对照pLKO.1，运用脂质体法分别与包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2. G共同转染人胚肾细胞293T，制备具有感染能力慢病毒颗粒；收集、纯化含病毒颗粒的上清液并感染人肝癌HepG2细胞，设未处理HepG2细胞为空白对照，采用Real time PCR 和Western blotting检测感染48 h和72 h后HepG2细胞中HDAC2基因mRNA和蛋白表达水平，鉴定、分析重组质粒的干扰效果。结果：与空白对照组相比，3条干扰序列转染肝癌HepG2细胞后均能明显抑制HDAC2 mRNA的表达（ P＜0.05），其中以pLKO.1-HDAC2-shRNA 1组的抑制率更明显，达到82.09％；3条干扰序列均能明显抑制HDAC2蛋白的表达（ P＜0.05），以pLKO.1-HDAC2-shRNA 1组和3组的干扰效果最明显，但两者相比较差异无统计学意义（ P＞0.05）。结论：构建的重组质粒pLKO.1-HDAC2-shRNA能从转录水平和蛋白水平有效抑制HDAC2基因在HepG2细胞中表达。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄韻祝	贵州医科大学附院生化科	5	12	2.0	3.0
2	娄方方	贵州医科大学医学检验学院	4	7	2.0	2.0
3	孔维莹	贵州医科大学附院生化科	8	9	2.0	2.0
4	黄健	贵州医科大学附院生化科	13	33	4.0	5.0
5	刘燕青	贵州医科大学医学检验学院	2	0	0.0	0.0