UV-B胁迫下紫花苜蓿qRT-PCR内参基因的筛选

• 作者: 崔为体 张薇 段星亮 汪瑾 沈文飚 谢彦杰
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 紫花苜蓿 实时荧光定量PCR 内参基因 geNorm NormFinder
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 248-254
• 分类号: Q781
• 语种: 中文
• DOI: 10.7685/j.issn.1000-2030.2015.02.011

摘要

[目的]在植物代谢通路关键调控基因表达的相关研究中,筛选各种条件下合适的内参基因至关重要.[方法]以UV-B为主要胁迫,运用荧光定量PCR技术以及geNorm和NormFinder软件,对不同取样时间(处理后0、1、2和5d)的紫花苜蓿(Medicago sativa L.)幼苗根、茎、叶组织中Actin2、GAPDH、MSC27、18S RNA、-tublin、bZIP、UBQ、PPPrep、Ms03_50f03和Ms03_69f07等候选内参基因表达的稳定性进行研究.[结果]geNorm软件显示:紫花苜蓿幼苗根部UV-B胁迫下MSC27和UBQ的稳定值(M)较小,增加第3个内参基因后变异值(V)基本不变,表明选用2个内参基因即可;茎部则是MSC27和Actin2的M值较小,同时相应的V值也满足要求;而使用M值较小的Actin2和GAPDH为内参,在研究叶片基因表达时可以获得更加准确的结果,当增加第3个内参基因时,V值变大,反而影响结果.同时发现,18S RNA和β-tublin在根和茎叶中的稳定性均较差,因此不适宜作为内参基因使用.NormFinder的结果与上述结果相似,结果差异部分的原因可能是因为算法不同.[结论]在UV-B胁迫下,紫花苜蓿幼苗根部中MSC27和UBQ的表达较为稳定,而在茎部则以MSC27和Actin2为宜,使用Actin2和GAPDH为内参在研究叶片基因表达时可以获得更加准确的结果.本研究对UV-B胁迫下紫花苜蓿中关键基因的定量表达分析具有重要的实用价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈文飚	南京农业大学生命科学学院	72	1962	22.0	44.0
2	汪瑾	南京农业大学生物学实验教学中心	13	126	6.0	11.0
3	张薇	南京农业大学生命科学学院	7	13	2.0	3.0
4	崔为体	南京农业大学生命科学学院	5	22	2.0	4.0
5	谢彦杰	南京农业大学生命科学学院	8	24	2.0	4.0
6	段星亮	南京农业大学生命科学学院	2	7	1.0	2.0