双峰驼天然重链抗体可变区酵母双杂交文库的构建与鉴定

• 作者: 付向晶 党如意 刘丹丹 杜恩岐 王兴龙 王燕平 胡湘云 范文涛 高小龙
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 双峰驼 重链抗体可变区 酵母双杂交
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 1071-1076
• 页数: 6页
• 分类号: Q789
• 字数: 3449字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2015.06.025

摘要

构建双峰驼天然重链抗体可变区(VHH)酵母双杂交文库,并对文库质量进行鉴定.采集未经免疫的6月龄雌性双峰驼外周血、骨髓、脾和淋巴结,并从外周血中分离淋巴细胞.抽提总RNA,反转录为cDNA,用2对引物经过2轮PCR扩增得到400 bp左右的双峰驼VHH片段.根据Clontech公司Mate&PlateTM library construction system使用手册,将带有同源臂的VHH片段与线性化的pGADT7-Rec质粒共转化Y187酵母感受态细胞,转化产物涂布SD/-Leu平板,30℃倒置培养3～5 d后,收集平板上的所有克隆,即为双峰驼天然重链抗体可变区酵母双杂交文库.对文库的滴度、重组效率及多样性进行鉴定.结果显示,本研究构建的双峰驼天然重链抗体可变区酵母双杂交文库库容为2.07×107,滴度为7.6×108 cfu·mL-1.随机挑取47个独立克隆进行菌落PCR鉴定,43个含有VHH片段,重组率为91.5％;选取其中19个测序,均为独立克隆,且多样性好.该研究成功构建双峰驼天然重链抗体可变区酵母双杂交文库,且文库质量满足要求,为进一步获得特定抗原的VHH奠定了基础.