大黄鱼Wap65-2基因成熟肽区酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定

• 作者: 李长红 裘天休 陈炯
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: Wap65-2 酵母双杂交 表达 自激活 毒性
• 年，卷（期）: 2015,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 108-113
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.08.016

摘要

用大黄鱼Wap65-2基因成熟肽区构建酵母双杂交诱饵质粒，并对诱饵质粒进行自激活活性及毒性检测。从大黄鱼（Larimichthys crocea）肝组织cDNA中扩增Wap65-2基因成熟肽片段（LcWap65-2m），将其克隆至pGBKT7载体中，获得诱饵载体pGBKT7-LcWap65-2m，经PCR、酶切和测序验证无误后，转化至酵母菌株Y187中，在营养缺陷培养基中观察重组蛋白的毒性作用和自激活活性，同时利用Western blot分析重组蛋白的表达。成功扩增LcWap65-2m，并克隆至pGBKT7载体中；Western blot检测结果表明，pGBKT7-LcWap65-2m在酵母细胞中表达诱饵蛋白LcWap65-2m；表型筛选结果显示，LcWap65-2m无毒性作用和自激活活性。成功构建了LcWap65-2m酵母双杂交诱饵载体，为进一步利用酵母双杂交技术筛选与Wap65-2相互作用的蛋白奠定基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李长红	宁波大学海洋学院生物化学与分子生物学实验室	17	122	6.0	10.0
2	陈炯	宁波大学海洋学院生物化学与分子生物学实验室	100	594	13.0	18.0
3	裘天休	宁波大学科技学院	2	2	1.0	1.0