生物素标记的布鲁菌多克隆抗体的制备

• 作者: 孟日增 宋秀玲 徐坤 李丽 李娟 殷德辉 鞠文
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 布鲁菌 多克隆抗体 免疫检测
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 诊断制剂
• 页码范围: 147-150,154
• 分类号: R378.5|R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 制备生物素标记的兔抗牛种布鲁菌544A多克隆抗体,并进行鉴定.方法 复苏并扩大培养牛种布鲁菌544A,灭活后制备灭活疫苗,经背部皮下多点注射免疫新西兰大白兔,5次免疫后,经心脏采血,分离血清,采用硫酸铵盐析法对血清中的多克隆抗体进行粗提,再通过蛋白亲和柱层析法对抗体进一步纯化,利用SDS-PAGE分析抗体的纯度,间接ELISA法检测抗体的效价和特异性,Bradford法检测抗体的蛋白含量,并利用生物素对抗体进行标记.结果 制备的牛种布鲁菌544A的兔多克隆抗体纯度较高,效价为1∶256 000,特异性较好,蛋白含量为2.83 mg/ml,每摩尔蛋白中标记的生物素摩尔数为3.09.结论 成功制备了生物素标记的牛种布鲁菌多克隆抗体,为下一步研制牛种布鲁菌免疫检测试剂盒奠定了物质基础.