中国人乳β-酪蛋白基因克隆表达及生物信息学分析

• 作者: 任皓威 刘宁 李春 顾鑫
• 来源期刊: 中国食品学报
• 关键词: β-酪蛋白 基因 克隆 序列分析
• 年，卷（期）: 2015,（8）
• 所属期刊栏目: 食品安全与检测
• 页码范围: 231-237
• 语种: 中文
• DOI: 10.16429/j.1009-7848.2015.08.033

摘要

文献显示:牛β-酪蛋白(CSN2)目前有12种遗传变种,提示人类中也可能存在这种现象.为探究中国人乳-酪蛋白是否与NCBI数据库中该种蛋白的1级结构具有差异性,验证作者先前对中国人乳β-酪蛋白氨基酸序列的分析,采集正常中国女性乳腺组织,提取总RNA,并以其为模板,通过RT-PCR方法扩增人乳β-酪蛋白的编码区(CDS)基因,连接T载体测序,然后提交至GenBank(登录号:KF 751868).与NCBI上人β-酪蛋白的核苷酸序列比较,所得人乳β-酪蛋白CDS序列同源性达到100％,说明该基因在不同人种间具有高度保守性.由其核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行生物信息学分析,结果:理论等电点(pI)5.52,该蛋白质不存在跨膜结构,具有较强的疏水区域.连接重组质粒和PET-30a-GST载体后,转化大肠杆菌BL21(DE3)获得表达菌株,37℃诱导4h,目标重组蛋白以包涵体形式表达,通过Ni2+-NTA柱纯化重组蛋白,经SDS-PAGE验证,成功构建原核表达载体PET-30a-GST-CSN2,并获得重组人乳β-酪蛋白.这为进一步研究中国人乳β-酪蛋白奠定良好的基础.