茎-环RT-qPCR法定量检测羊背最长肌3种miRNA的表达

• 作者: 吴建良 周水良 姜俊芳 宋雪梅 李慧 王霄鹏 石放雄 蒋永清
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 湖羊 肌肉 miRNA 茎-环RT-qPCR
• 年，卷（期）: 2015,（12）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 31-35
• 页数: 5页
• 分类号: S859.1
• 字数: 4356字
• 语种: 中文

摘要

本研究建立了一种可避免基因组污染的茎—环RT-qPCR miRNA定量检测方法.利用该方法可准确、快速、低成本地检测湖羊和杜泊羊×湖羊杂交羊肌肉中miR-1、miR-133和oar-miR-299-5p的表达.以6月龄雄性湖羊和杜泊羊×湖羊杂交羊F1代各4只的背最长肌样品为研究对象,利用特异性茎环反转录引物以及miRNA上下游引物对3种miRNA进行基于SYBR Green Ⅰ的荧光定量PCR检测,并以5S rRNA为内参基因,2-△△Ct法检测miRNA的相对表达量.结果显示:6月龄雄性湖羊背最长肌中oar-miR-299-5p表达量极显著高于6月龄雄性杜泊羊×湖羊杂交羊(P＜0.01),提示oar-miR-299-5p可能与湖羊早期背最长肌的生长发育相关.