猪乙脑病毒重组E基因的克隆表达及间接ELISA检测方法研究

• 作者: 刘惠莉 彭丽英 李海洋 殷秀辰 陶洁 饶柏钟
• 来源期刊: 上海农业学报
• 关键词: 乙脑病毒 E基因 重组E蛋白 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 字数: 3444字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15955/j.issn1000-3924.2015.03.01

摘要

参照已发表的猪乙脑病毒（JEV）基因组序列，设计引物，扩增出 E 基因，克隆到 pMD19-T 载体中。序列分析表明：E 基因与 NCBI 登录的 JEV 毒株 E 基因序列同源性达到96.6％—99.7％；遗传进化分析表明：该 JEV属于 GIII 病毒。将 E 基因片段亚克隆到 pET32a-E，IPTG 诱导表达 E 蛋白。Western Blot 检测表明：该重组蛋白能与 JEV 高免血清发生非特异性反应，证明该表达产物为 JEV E 蛋白。以重组 E 蛋白为包被抗原，建立检测猪 JEV抗体的间接 ELISA 方法，检测160份猪血清样品，与猪 JEV 抗体检测试剂盒进行平行性对比，结果显示二者的吻合率为92.2％，表明建立的 ELISA 方法具有较好的特异性，有望为临床提供一种 JEV 血清抗体检测方法。