溶藻弧菌双组分调控系统KdpDE减毒活疫苗的构建及其免疫效果评价

• 作者: 吴灶和 庞欢瑛 张燕飞 汤菊芬 简纪常 鲁义善
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 溶藻弧菌 KdpDE 减毒活疫苗 斑马鱼 免疫保护率
• 年，卷（期）: 2015,（10）
• 页码范围: 1558-1568
• 分类号: S941
• 语种: 中文
• DOI: 10.11964/jfc.20150109690

摘要

为了研究溶藻弧菌双组分调控系统KdpDE减毒活疫苗对鱼体的免疫保护作用,本研究采用Overlap PCR和同源重组技术,构建了kdpD/kdpE(kdpDE)基因无标记基因框内敲除突变株.对野生株和缺失突变株的生物学特性及致病性进行了比较研究,发现kdpDE的缺失对溶藻弧菌的生长速率和胞外蛋白酶活性的影响不明显,但是突变株的泳动能力、生物被膜形成能力较野生株下降.斑马鱼致病性实验结果显示,突变株毒力下降78.5倍,表明减毒株构建成功,可以作为减毒活疫苗的候选菌株.突变株在鱼体内存活能力实验结果显示,注射免疫7d后,鱼体内未检测到该菌.以突变株△kdpDE为抗原,分别用注射和浸泡的方式免疫斑马鱼,免疫后第28天用溶藻弧菌和哈维氏弧菌攻毒,评估该疫苗候选株及不同免疫方式对斑马鱼的保护效果.实验结果表明,免疫后的斑马鱼能够抵抗溶藻弧菌的感染,其中注射免疫组的免疫保护率达83.3％,浸泡免疫组次之(66.7％);同时,该减毒活疫苗能刺激斑马鱼对哈维氏弧菌产生交叉保护效应,其中注射免疫组的免疫保护率为65.5％,浸泡免疫组为55.2％.以上结果表明,kdpDE基因敲除突变株可能是抵抗溶藻弧菌感染的有效候选减毒活疫苗.