环形泰勒虫裂殖体感染的牛淋巴细胞中galectin-1基因的原核表达与鉴定

• 作者: 徐春兰 李亚琼 李倩 李有全 殷宏 秦鸽鸽 蔡葵蒸 韩元
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 牛 半乳糖凝集素1 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 497-502
• 页数: 6页
• 分类号: S852.723
• 语种: 中文

摘要

为了获得重组牛半乳糖凝集素1(galectin-1),从被环形泰勒虫裂殖体感染的牛淋巴细胞中提取总RNA,反转录合成第一链cDNA,利用RT-PCR扩增galectin-1基因.将目的片段连接到载体pET-30a(+)上,并转化入表达菌BL21 (DE3)中,经PCR、酶切及测序验证正确后,进行IPTG诱导表达和His-Ni-Resin蛋白纯化.SDS-PAGE结果表明,获得了约17 ku的表达产物.Western-blot分析表明,表达产物与抗His标签的小鼠单克隆抗体、绵羊抗牛半乳糖凝集素1多克隆抗体均能发生反应.重组半乳糖凝集素1的多克隆抗体也可以较好地识别天然蛋白.本试验成功表达了牛半乳糖凝集素1,并制备了其多克隆抗体,为以后进行与半乳糖凝集素1相互作用蛋白的研究奠定了基础.