玉米半胱氨酸蛋白酶的原核表达及酶学性质表征

• 作者: 刘回民 刘景圣 程国栋 詹冬玲 郑明珠 陈方奇
• 来源期刊: 吉林大学学报（理学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 玉米 半胱氨酸蛋白酶 原核表达 酶学性质
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 1054-1059
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 2843字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13413/j.cnki.jdxblxb.2015.05.43

摘要

以玉米基因组 DNA 为模板扩增获得玉米半胱氨酸蛋白酶基因(zmCP1),先将其克隆至 pET-28a(+)原核表达载体中,再转化至大肠杆菌 BL21(DE3)中.对重组酶进行诱导表达后经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白免疫印迹(Western blotting)鉴定,经 Ni 柱纯化后其质量分数大于95%.利用二肽荧光底物(R-AMC)和四肽荧光底物(LAFR-AMC)进行酶反应动力学实验,证明该酶对小底物 R-AMC 具有更好的亲和力和催化活性.重组酶的酶学性质研究表明,该酶最适温度为55℃,最适 pH 值为6.0,在90℃下的半衰期为39.82 min.