玉米半胱氨酸蛋白酶突变体W308C的原核表达和酶学性质表征

• 作者: 刘回民 刘景圣 程国栋 詹冬玲 郑明珠 陈方奇
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 半胱氨酸蛋白酶 突变体 原核表达 酶学性质
• 年，卷（期）: 2014,（15）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 122-126
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 3813字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201415025

摘要

通过对玉米半胱氨酸蛋白酶(cysteine protease from Zea mays,zmCP1)同源模建和底物对接研究发现,W308位点在木瓜蛋白酶家族(C1家族)高度保守,且位于zmCP1催化三联体残基N306位点附近,与绝大多数底物形成π-π键,可参与底物和酶活性中心的结合,是该酶的关键位点;结合Rosetta design程序设计,对W308位点进行突变,获得W308C突变体,并在大肠杆菌BL21中表达.酶学性质表征实验结果表明:突变体W308C的最适温度为55℃,最适pH 6.0;在70、80、90℃下的半衰期为75.33、57.24、40.29 min,分别是野生型的1.21、1.19、1.01倍;突变体W308C和野生型的特异性常数Kcat/Km分别为11.02、5.92 L/(μmol·min),催化活性提高了0.86倍.