二硫键异构酶DsbC介导重组瑞替普酶在E. coli中可溶表达

• 作者: 关怡新 姚善泾 禚孝发
• 来源期刊: 高校化学工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 瑞替普酶 二硫键异构酶 DsbC 共表达 可溶表达
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 生物化工
• 页码范围: 600-606
• 页数: 7页
• 分类号: Q816
• 字数: 3515字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-9015.2015.04.30.01

摘要

瑞替普酶(reteplase)是第三代溶血栓药物,其结构中含有9对二硫键,因而重组瑞替普酶在E. coli中表达时极易形成包涵体.研究引入二硫键异构酶DsbC介导瑞替普酶折叠过程中错配二硫键的异构,从而促进其在E. coli中的可溶表达.首先分别构建了reteplase、DsbC表达载体pBAD/HisA-R及pACYCDuet-1-DsbC,并共转化入E. coli BL21菌株,获得了瑞替普酶的DsbC共表达体系.在此基础上,考察了发酵过程中诱导方式及时间、培养温度、诱导剂浓度对瑞替普酶可溶表达量的影响.在37℃、200 r?min?1的条件下培养到OD600值为0.6左右时,加入0.1 mmol?L?1的IPTG诱导二硫键异构酶DsbC的表达;在25℃、160 r?min?1的条件下培养1 h后,加入0.5 g?L?1的L-阿拉伯糖诱导目标蛋白瑞替普酶表达,继续培养10 h收获菌体,结果表明近 60%的瑞替普酶实现了可溶表达,其产量约为70 mg?L?1发酵液,用平板溶圈法测得纯化后瑞替普酶的活性为2.35×105 IU?mg?1.通过共表达二硫键异构酶DsbC实现了瑞替普酶在E. coli中的可溶表达,有助于瑞替普酶的临床及折叠机理研究,对其他富含二硫键的重组蛋白质生产具有一定的指导意义.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	关怡新	浙江大学化学工程与生物工程学院	67	627	12.0	20.0
2	姚善泾	浙江大学化学工程与生物工程学院	224	2284	23.0	34.0
3	禚孝发	浙江大学化学工程与生物工程学院	1	2	1.0	1.0