肝再生磷酸酶-1稳定转染肝癌细胞株的建立及其生物学功能

• 作者: 徐康 徐鋆耀 王开美 王捷 褚忠华 金少文
• 来源期刊: 中华实验外科杂志
• 关键词: 肝细胞癌 肝再生磷酸酶-1 反转录病毒载体 生物学功能
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 302-305
• 页数: 4页
• 字数: 3152字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2015.02.030

摘要

目的 构建肝再生磷酸酶-1(PRL-1)真核表达载体,建立稳定过表达PRL-1的肝细胞癌Huh7细胞株,研究PRL-1在Huh7细胞中的生物学功能.方法 应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术从人肝癌组织总RNA中扩增PRL-1基因编码区域(CDS)全长序列,与双酶切的pMSCV-PIG质粒连接,经PCR及测序鉴定pMSCV-血细胞凝集素(HA)-PRL-1载体构建成功.用293T细胞包装病毒,并感染Huh7细胞,1 mg/L嘌呤霉素持续加压筛选2周后,荧光显微镜、流式细胞仪、实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)及Western blot检测PRL-1在Huh7中的表达.PRL-1稳定转染细胞株构建成功后,用细胞计数试剂盒(CCK-8)法进行细胞增殖实验、平板克隆形成实验和Transwell侵袭实验研究PRL-1在Huh7细胞中的生物学功能.结果 测序结果显示克隆的PRL-1基因CDS序列完全正确,且正确插入到pMSCV-PIG载体中,荧光显微镜及流式细胞仪检测结果显示细胞稳定转染效率在90％以上,FQ-PCR结果显示PRL-1稳定转染组其mRNA表达是对照组的(4.4±1.5)倍(P＜0.05),Western blot结果显示PRL-1在Huh7细胞中过表达.CCK-8细胞增殖实验结果显示PRL-1促进Huh7细胞增殖(P＜0.01).PRL-1稳定转染细胞2周克隆形成率为(26.7±1.9)％,明显高于对照组[(7.3±0.8)％,P＜0.01].PRL-1稳定转染组较对照组侵袭细胞数量增多(P＜0.01).结论 PRL-1肝细胞癌Huh7稳定转染细胞株构建成功,PRL-1促进Huh7细胞增殖、克隆形成及侵袭.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王捷	中山大学孙逸仙纪念医院肝胆外科	180	825	15.0	22.0
2	徐康	中山大学孙逸仙纪念医院肝胆外科	12	54	4.0	6.0
3	褚忠华	中山大学孙逸仙纪念医院胃肠外科	94	367	8.0	13.0
4	徐鋆耀	中山大学孙逸仙纪念医院肝胆外科	30	151	8.0	11.0
5	金少文	中山大学孙逸仙纪念医院肝胆外科	5	6	1.0	2.0
6	王开美	中山大学孙逸仙纪念医院儿科	4	5	1.0	2.0