对虾白斑综合征病毒囊膜蛋白VP53B原核表达及抗血清的制备

• 作者: 姚迁会 潘迎捷 王永杰 覃冰
• 来源期刊: 微生物学通报
• 关键词: 对虾白斑综合征病毒 囊膜蛋白 VP53B 原核表达 多克隆血清
• 年，卷（期）: 2015,（10）
• 所属期刊栏目: 简报
• 页码范围: 1977-1983
• 语种: 中文
• DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150008

摘要

[目的]研究对虾白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)囊膜蛋白sVP53B克隆、表达、纯化及抗血清制备.[方法]根据WSSV囊膜蛋白基因序列,设计引物,PCR扩增出功能序列(Svp53B),构建到pET-16b载体后,转化至大肠杆菌Rosetta2诱导表达,用SDS-PAGE、Westem blotting检测优化表达.表达产物采用Ni-NTA琼脂糖磁珠进行纯化、割胶回收融合蛋白,以纯化的Svp53B-his为抗原,免疫兔子获得多克隆抗体,通过间接ELISA检测抗体的效价.[结果]构建重组质粒pET-16b-Svp53B,在大肠杆菌Rosetta 2中以1 mmol/L IPTG诱导表达量最高,主要以包涵体形式表达.纯化包涵体蛋白免疫兔子,获得多克隆血清,效价达到1:150 000.[结论]原核表达并纯化得到高纯度的WSSV囊膜蛋白sVP53B,制备的兔源多克隆血清亲和力高、特异性好,这对后期进一步研究VP53B与经口侵染相关功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	潘迎捷	上海海洋大学食品学院	111	1207	20.0	28.0
5	王永杰	上海海洋大学食品学院	9	14	2.0	3.0
9	姚迁会	上海海洋大学食品学院	1	1	1.0	1.0
13	覃冰	上海海洋大学食品学院	1	1	1.0	1.0