利用CRISPR-Cas9系统建立Prmt1敲除的小鼠胚胎干细胞系

• 作者: 张业 杨光辉 蔡昀
• 来源期刊: 医学研究杂志
• 学科: 医学
• 关键词: CRISPR-Cas9 Prmt1 小鼠胚胎干细胞
• 年，卷（期）: 2015,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 18-22,29
• 页数: 6页
• 分类号: R393
• 字数: 4727字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11969/j.issn.1673-548X.2015.12.006

摘要

目的 利用CRISPR-Cas9系统构建Prmt1敲除的E14小鼠胚胎干细胞系,并分析验证其敲除效果.方法 利用第3代基因编辑技术CRISPR-Cas9系统,针对Prmt1第4、5、6、7外显子设计4条gRNAs,gRNA两两组合转染E14细胞,特异性的敲除E14细胞中的Prmt1,并在蛋白质水平,mRNA水平和基因组水平分别验证敲除效果.结果 与对照组相比,两组敲除实验组都检测不到Prmt1蛋白质和mRNA的表达,基因组测序结果分析显示,两实验组中Prmt1的mRNA均出现无义突变,使其mRNA的翻译异常终止.同时,实时定量PCR结果显示,精氨酸甲基转移酶家族其他成员Prmt2,Carm1和Prmt6 mRNA表达不受影响.结论 成功获得特异性敲除Prmt1的E14细胞系,为研究Prmt1在胚胎干细胞中的作用提供了重要工具.