壳聚糖转运针对TNFαsiRNA的可行性及其对于炎症因子抑制效应的初步研究

• 作者: 丁江华 左新年 戴祺 邹国辉 郑冰冰
• 来源期刊: 临床与病理杂志
• 关键词: 炎症性肠病 肿瘤坏死因子α 壳聚糖 小干扰RNA 基因沉默
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 417-422
• 页数: 6页
• 字数: 3857字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3978/j.issn.2095-6959.2015.03.018

摘要

目的:初步探索壳聚糖/siRNA纳米颗粒应用于炎症性肠病的可行性.方法:应用直接混合法将壳聚糖溶液与siRNA照N/P比为60混合形成壳聚糖/siRNA纳米颗粒,采用Zetasizer粒度仪对纳米颗粒直径进行检测,扫描电镜观察其形态以及透射电镜观察其结构;将纳米粒与RNA酶孵育后采用2%琼脂糖凝胶电泳分析其保护作用;采用细菌脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)对小鼠巨噬细胞系RAW264.7进行炎症因子诱导后进行体外实验,荧光显微镜观察其转染效率,采用针对TNFα的siRNA进行转染,TaqMan荧光定量PCR和ELISA对TNFα的表达进行定量分析;利用MTT方法对转染后的细胞进行活力测试.结果:壳聚糖/siRNA纳米粒形态较为均一,粒径在200 nm左右;壳聚糖能够与siRNA形成可逆性结合,保护siRNA不被酶降解长达120 min以上;该纳米粒能够高效率的实现对巨噬细胞的转染;纳米粒转染后对LPS诱导巨噬细胞分泌大量的TNFα起到显著的抑制作用,效率高达50%以上,且细胞活性没有明显改变.结论:壳聚糖/siRNA纳米粒系统能够有效的转染巨噬细胞,实现对炎症因子TNFα的抑制作用,为炎症性肠病的分子治疗提供了一定的参考价值.