靶向沉默Mcl－1基因对感染不同毒力结核杆菌小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的影响

• 作者: 吴江东 吴芳 张万江 张宇晴 王婵 王小芳 王新敏 王飞雨 章乐
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 Mcl-1基因 腹腔巨噬细胞 RNA干扰 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2015,（12）
• 所属期刊栏目: ? 论 著?
• 页码范围: 2195-2201
• 页数: 7页
• 分类号: R363.1
• 字数: 5093字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2015.12.014

摘要

目的：通过RNA干扰技术特异性沉默Mcl－1基因，探讨下调Mcl－1基因对感染不同毒力结核杆菌小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的影响。方法：分别用制备好的新疆地区流行的优势强毒结核分枝杆菌临床分离株（简称强毒株）、结核分枝杆菌国际标准强毒株 H37Rv（简称 H37Rv）、结核分枝杆菌国际标准无毒株 H37Ra（简称H37Ra）和卡介苗（ BCG）菌悬液感染BALB／c小鼠，再以筛选并构建好的Mcl－1－shRNA作用于感染的小鼠模型，同时设立相应对照组，于作用后1 d、3 d、5 d和7 d提取小鼠腹腔巨噬细胞，应用实时荧光定量PCR和Western blot检测各组小鼠腹腔巨噬细胞中Mcl－1 mRNA和蛋白的表达；应用流式细胞术检测各组巨噬细胞的凋亡水平。结果：小鼠被不同毒力的结核杆菌感染后其腹腔巨噬细胞中Mcl－1 mRNA和蛋白的表达水平均有不同程度的升高，其中以感染了强毒株和H37Rv的腹腔巨噬细胞升高最为明显（ P＜0．05）；应用RNA干扰技术沉默Mcl－1基因后，Mcl－1 mRNA和蛋白的表达水平明显低于对照组（ P＜0．05）；流式细胞术分析显示，下调Mcl－1基因的表达可诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡。结论：应用Mcl－1－shRNA可有效沉默Mcl－1在感染了不同毒力结核杆菌小鼠腹腔巨噬细胞中的表达，并能上调巨噬细胞的凋亡水平。