斑点热群立克次体实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

• 作者: 吴捷 吴维学 张丽娟 曾祥洁 李沅 王少玲 苏新元 贾鹏本 马焱
• 来源期刊: 现代预防医学
• 学科: 医学
• 关键词: 实时荧光定量PCR 外膜蛋白A基因 斑点热群立克次体
• 年，卷（期）: 2015,（22）
• 所属期刊栏目: 实验技术及其应用
• 页码范围: 4137-4139,4146
• 分类号: R376
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨实时荧光定量PCR快速检测斑点热群立克次体标本的应用价值.方法 根据斑点热群立克次体外膜蛋白A (OmpA)基因保守序列设计TaqMan特异性探针和引物,进行实时荧光定量PCR方法学评估,并同时运用该法和普通PCR法对对海南省2012年不明原因发热病人157份血标本进行斑点热群立克次体的检测及结果分析.结果 本研究建立的定量标准曲线循环阈值(Ct值)和模板拷贝数呈良好的线性关系(R2值为0.998).该法能检出斑点热群立克次体阳性标准品—西伯利亚立克次体(R.sibirica)最小浓度为102 copies/μl,灵敏度比普通PCR高100倍.用该法检测斑点热群立克次体DNA,结果为阳性,检测金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、致泻性大肠埃希菌和副溶血弧菌等其他病原细菌DNA结果均为阴性.采用实时荧光定量PCR法对实验室库存的发热病人血标本DNA进行回顾性检测,结果示阻性2例,检出率为1.2％ (2/157),而普通PCR检测结果均为阴性.结论 实时荧光定量PCR法具有快速、特异和灵敏的优点,在处理突发公共卫生事件中可发挥快速检测的优势,在斑点热诊断中具有重要的临床意义.