单管多重荧光定量RT-PCR方法鉴别A组轮状病毒及诺如病毒GⅠ型和GⅡ型

• 作者: 徐德顺 曹芳芳
• 来源期刊: 中国卫生检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 轮状病毒 诺如病毒 多重荧光逆转录-聚合酶链反应 GⅠ型 GⅡ型
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 微生物检测方法
• 页码范围: 823-826
• 页数: 4页
• 分类号: R446.5
• 语种: 中文

摘要

目的 建立能同时检测A组轮状病毒、诺如病毒GⅠ型和GⅡ型的多重荧光定量RT-PCR方法.方法 分别选用轮状病毒NSP3基因、诺如病毒GⅠ型和GⅡ型orf1与orf2基因中的64 bp、90 bp和185 bp片段作为荧光定量PCR检测的靶标,设计引物和TaqMan探针,构建标准品,绘制标准曲线,评价检测方法的重复性、特异度和灵敏度,并对138份粪便标本进行检测及测序验证.结果 3种病毒对应的标准曲线分别为:轮状病毒:y=-3.9lgx +41.204;诺如病毒GⅠ型:y=-3.06lgx +40.716;诺如病毒GⅡ型:y=-3.29lgx+ 41.538,质粒标准曲线的方差系数为0.997,灵敏度达到每个反应102 copy/μl,特异度强.138份样本中检出A组轮状病毒、诺如病毒GⅠ型和GⅡ型的检出率分别为32.6％、5.8％和26.1％,与基因测序比对结果相符.结论 构建可用于A组轮状病毒及诺如病毒GⅠ型和GⅡ型的多重荧光定量RT-PCR方法快速、特异且灵敏,可用于临床病原诊断和流行病学调查.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐德顺		59	129	6.0	9.0
2	曹芳芳		2	4	1.0	2.0