小鼠白细胞介素IL-35基因慢病毒表达载体的构建及鉴定

• 作者: 刘超波 孙俊 李明才 李燕 潘秀和 高巧艳
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 医学
• 关键词: IL-35 慢病毒 构建 共转染 鉴定
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 6-11
• 页数: 6页
• 分类号: R392.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2016.01.002

摘要

[目的]构建小鼠白细胞介素IL-35基因慢病毒表达载体并鉴定.[方法]通过PCR法扩增出小鼠IL-35基因片段,将其与经XhoⅠ和Xba Ⅰ双酶切的慢病毒载体pLVX-IRES-ZsGreen1连接,构建慢病毒重组质粒pLVX-IL-35-IRES-ZsGreen1.用无内毒素试剂盒提取重组质粒后,将其与病毒包装所需的3个辅助质粒共转染到人肾胚(HEK) 293T细胞中包装能表达IL-35的慢病毒颗粒.该病毒培养上清经浓缩后,梯度稀释法检测其滴度.用浓缩后的病毒感染HEK293T细胞,然后通过荧光显微镜观察荧光蛋白的表达并结合RT-PCR法检测IL-35基因在该细胞中的表达.[结果] IL-35慢病毒表达载体构建成功,包装的慢病毒滴度为1×109 TU/mL,通过荧光显微镜和RT-PCR检测发现IL-35在HEK293T细胞中表达.[结论]成功构建IL-35慢病毒表达载体且IL-35蛋白能在HEK293T细胞中过表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李明才		30	137	5.0	11.0
2	李燕		28	53	5.0	7.0
3	潘秀和		9	20	1.0	4.0
4	刘超波		6	20	1.0	4.0
5	孙俊		7	21	1.0	4.0
6	高巧艳		10	22	3.0	4.0