IL-35慢病毒表达载体的构建及其在鼻咽癌细胞中的表达

• 作者: 冯涛 史浪涛 吴学举 张学刚 朱立 李家勇 杨明义 林雯昕 赵娟 阮进松 陈祥 韩鹏
• 来源期刊: 国际医药卫生导报
• 关键词: 白细胞介素-35 质粒 慢病毒 鼻咽癌细胞
• 年，卷（期）: 2020,（18）
• 所属期刊栏目: 科研课题
• 页码范围: 2685-2690
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1007-1245.2020.18.034

摘要

目的 通过构建过表达IL-35的慢病毒载体,转染鼻咽癌细胞,建立稳定表达IL-35的鼻咽癌细胞株,为进一步研究IL-35对鼻咽癌细胞的影响奠定基础.方法 根据GenBank中的EBI3和IL-l2p35基因序列,设计引物克隆EBI3和IL-l2p35基因.PCR产物和pLVX-IRES-ZsGreenl质粒(命名为H145)经过经酶切、转化、筛选、测序鉴定等后获得重组质粒pLVX-mIL-35-IRES-ZsGreenl,命名为H11864.将重组质粒H11864和H145经过慢病毒包装后转染HEK-293T细胞,收取病毒浓缩液并检测其滴度.用病毒浓缩液感染CNE细胞,用Real-time PCR和ELISA检测IL-35的表达情况.检测IL-35过表达对鼻咽癌细胞增殖能力的影响.结果 测序结果显示,本研究成功构建重组质粒pLVX-mIL-35-IRES-ZsGreenl.pCDH-GFP组及pCDH-IL-35-GFP组的慢病毒滴度分别为5.10×108 TU·m1-1和1.03×109TU·ml-1.Real-time PCR检测结果显示,与CNE-H11864(4 626 159.23±246 221.40)相比,CNE-H145(1.22±0.77)和CNE(0.80±0.65)中IL-35的mRNA表达量显著较低(均P＜0.01).ELISA检测显示,CNE-H 11864中IL-35的蛋白含量为344.84 pg/ml,与CNE-H145的33.00 pg/ml相比,显著增高(P＜0.01).CCK-8检测结果表明,与空白组和质粒对照组相比,CNE-H11864组在转染72 h后吸光度值明显升高(均P＜ 0.05),并且在96 h进一步升高(均P＜0.01).结论 本研究成功构建稳定表达IL-35的鼻咽癌细胞株,IL-35蛋白能够促进人鼻咽癌细胞的增殖能力.