白细胞介素-35慢病毒表达载体的构建及稳转A549细胞系的建立

• 作者: 孔祥祯 田鑫 薛文华 闫丹 阚全程
• 来源期刊: 中国临床药理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 白细胞介素-35 慢病毒 肺癌
• 年，卷（期）: 2018,（18）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 2159-2163
• 页数: 5页
• 分类号: R97
• 字数: 3041字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13699/j.cnki.1001-6821.2018.18.009

摘要

目的 构建过表达白细胞介素(IL)-35的慢病毒载体,包装慢病毒并感染肺癌细胞A549建立过表达IL-35的A549稳定细胞株,为研究IL-35在肺癌发生发展中的作用奠定基础.方法 根据基因序列及所用载体序列设计用于无缝克隆的引物序列,用聚合酶链式反应(PCR)扩增IL-35基因,EcoR I和BamH I酶切PCR产物及载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro,经载体重组、转化、PCR鉴定和测序鉴定等获得重组质粒.将筛选出的重组慢病毒质粒与包装质粒共转染HEK-293T细胞,收取病毒浓缩液并检测其滴度.病毒浓缩液感染A549细胞,用Real-time PCR和Western blot方法检测稳转细胞系中IL-35的表达.结果 测序结果与预期完全符合,成功构建过表达载体IL-35-pCDH-CMV-MCS-EFl-copGFP-T2A-Puro.pCDH-GFP组及pCDH-IL-35-GFP组的慢病毒滴度分别为5.1×108和1.03×109 TU·mL-1.Western blot和real-time PCR显示,A549-IL35组的EBI3及P35蛋白相对表达量分别为0.27±0.05和0.75±0.02,A549-pGFP组的EBI3及P35蛋白相对表达量分别为0.06±0.01和0.24±0.01,A549-IL35组的EBI3及P35 mRNA的相对表达量分别为444.75 ±37.31和309.78±53.92,A549-pGFP组的EBI3及P35 mRNA相对表达量分别为1.03±0.05和1.04±0.03,差异均有统计学意义(均P ＜0.05).结论 成功构建了过表达IL-35的慢病毒载体和过表达IL-35的A549稳定细胞株.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	阚全程	郑州大学第一附属医院药学部	129	657	13.0	21.0
2	田鑫	郑州大学第一附属医院药学部	49	135	7.0	9.0
3	薛文华	郑州大学第一附属医院药学部	20	73	4.0	8.0
4	闫丹	郑州大学第一附属医院药学部	1	2	1.0	1.0
5	孔祥祯	郑州大学第一附属医院药学部	1	2	1.0	1.0