一种经miniSOG标记的人腺病毒的制备

• 作者: 屈建国 洪涛 肖蓉 邹小辉 郭小娟 鲁茁壮
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: 腺病毒 Ⅸ蛋白 miniSOG 病毒拯救
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 32-38
• 页数: 7页
• 分类号: R373.9
• 语种: 中文

摘要

为了探索腺病毒感染细胞后病毒核心在胞内运输的过程,本研究构建了一株经miniSOG标记Ⅸ蛋白的人腺病毒.首先,我们通过重叠延伸PCR的方法合成了miniSOG基因,将其克隆至pcDNA3表达载体后转染293细胞,荧光显微镜下可观察到miniSOG蛋白的表达,经固定,封闭,DAB-H2O2染色,OsO4固定染色后,可见表达miniSOG蛋白的细胞呈深褐色.之后将miniSOG构建至腺病毒穿梭载体pShuttle的Ⅸ基因3'端,并通过与骨架质粒pAdeasy-1在E.coli BJ5183细菌内同源重组获得了重组腺病毒质粒pAd5-ⅨSOG.pAd5-ⅨSOG质粒经Pac Ⅰ酶切线性化后转染293细胞,拯救出重组腺病毒HAdV-5-ⅨSOG.经过8轮扩增,超速离心纯化后获得2.0 ml浓度为6.0×1011 vp/mL的重组腺病毒,电子显微镜下可见完整病毒颗粒.本研究经反向遗传学技术对腺病毒载体进行改造,成功制备了经miniSOG标记的重组腺病毒HAdV-5-ⅨSOG,该病毒可用于腺病毒感染细胞的实时追踪.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	洪涛		74	361	10.0	15.0
2	屈建国		38	149	6.0	10.0
3	鲁茁壮		17	7	1.0	2.0
4	郭小娟		6	1	1.0	1.0
5	邹小辉		10	6	1.0	2.0
6	肖蓉		2	0	0.0	0.0