葡萄糖脱氢酶温控表达菌株的构建及其发酵工艺

• 作者: 张志萌 李杨 王正祥 董自星 路福平
• 来源期刊: 天津科技大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 葡萄糖脱氢酶 温敏型启动子 高效表达 发酵工艺优化
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 食品与生物技术
• 页码范围: 13-19
• 页数: 7页
• 分类号: Q93
• 字数: 4794字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13364/j.issn.1672-6510.20150057

摘要

膜结合型的吡咯喹啉醌依赖性葡萄糖脱氢酶(mPQQGDH,EC 1.1.5.2)是一种重要的氧化还原酶,因其在血糖诊断及葡萄糖传感器中的重要应用而受到广泛的关注.但是其低表达水平限制了这种酶的大规模工业化生产及应用.本文利用λ噬菌体的温敏型启动子PL-PR替换葡萄糖脱氢酶基因的启动子,构建了重组菌大肠杆菌(E.coli)B0013-120/pGCd::Km-PL-PR,并使重组菌的酶活比原始菌株提高了21.2%,.再通过发酵条件的优化,确定了mPQQGDH的最适诱导表达条件为:以甘油为碳源、诱导温度42,℃、诱导时间4,h、诱导前菌体密度A600=1.6.最后对该酶的酶学性质进行了分析,其最适反应温度和pH分别为25,℃和6.0,所得mPQQGDH的热稳定性在45,℃条件下可维持稳定的活性.这为葡萄糖脱氢酶更广泛的应用及工业化生产奠定了基础.