基于重叠延伸PCR构建幽门螺杆菌MreB重组载体

• 作者: 付亚娟 侯晓强 李芳 范聪聪 马金成 高婧
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 幽门螺杆菌 骨架蛋白 MreB 重叠延伸PCR 重组载体
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 415-420
• 页数: 6页
• 分类号: Q784
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2016.05.0071

摘要

[目的]基于重叠延伸PCR技术,构建串联亲和层析标签(TAP)标记的幽门螺杆菌骨架蛋白MreB的重组质粒.[方法]将幽门螺杆菌MreB基因终止密码子TAA前DNA序列(MreBa)、TAP和终止密码子TAA后的DNA序列(MreBb),通过重叠延伸PCR进行连接,形成大小约3.1 kb的融合片段MreBCF;MreBCF片段经Xho Ⅰ酶切、纯化后,克隆到经SmaⅠ和Xho Ⅰ双酶切的线性载体pK18mobSacB上.[结果]PCR、酶切及DNA测序的结果表明,重组质粒pK18MreBCF包含大小约为740 bp、1 400 bp和1 000 bp的三个片段(MreBa、TAP和MreBb),并且这三个片段的接头连接及核苷酸序列完全正确.[结论]利用重叠延伸PCR可对多个片段进行无缝连接,简便、高效地构建重组质粒;成功构建了重组质粒pK18 MreBCF,为将来幽门螺杆菌MreB蛋白功能复合体的分离和鉴定奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	付亚娟		14	13	2.0	3.0
2	侯晓强		20	49	4.0	6.0
3	李芳		4	3	1.0	1.0
4	高婧		2	0	0.0	0.0
5	马金成		1	0	0.0	0.0
6	范聪聪		1	0	0.0	0.0