构建以 eGFP 为报告基因的毕赤酵母表达载体

• 作者: 何娅 冯姣 席丽艳 易修文 肖星 蒋敏敏 陈庭金 陈志文 陈春梅
• 来源期刊: 皮肤性病诊疗学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 绿色荧光蛋白 毕赤酵母 克隆
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 152-155
• 页数: 4页
• 分类号: R34
• 字数: 2851字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-8468.2016.03.004

摘要

目的：构建以绿色荧光蛋白eGFP为报告基因的毕赤酵母表达载体，为后续致病真菌功能基因的eGFP融合基因过表达作铺垫。方法：利用In-Fusion系统构建eGFP的表达载体PPICZαB-eGFP，氯化锂转化毕赤酵母X33，通过含Zeocin（100μg／mL）抗性的YPD培养基筛选，将得到的菌落X33－eGFP以引物3′－AOX／5′－AOX及 eGFP－F／eGFP－R进行PCR，产物行琼脂糖凝胶电泳、测序验证eGFP片段是否成功插入，最后甲醛诱导表达。结果：以 X33－eGFP为模板的PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果显示片段eGFP成功插入至载体中，测序验证无突变。经甲醛诱导后的毕赤酵母X33－eGFP在蓝色荧光激发下，可观察到发出绿色荧光。结论：成功建立了毕赤酵母X33－eGFP，且证明了eGFP片段可以在毕赤酵母AOX启动子中得到表达。