一种来源于Burkholderia phytofirmans PsJN的ω-转氨酶的表达纯化及性质分析

• 作者: 冯进辉 吴洽庆 姜进举 朱敦明 杜允成 董文玥 陈启佳
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: ω-转氨酶 伯克氏菌 芳香族β-氨基酸 手性拆分
• 年，卷（期）: 2016,（7）
• 所属期刊栏目: 工业生物技术
• 页码范围: 912-926
• 语种: 中文
• DOI: 10.13345/j.cjb.150456

摘要

ω-转氨酶(ω-transaminase)可以通过手性拆分和不对称合成的催化反应来获得光学纯的手性胺类化合物和非天然氨基酸,在医药中间体合成中是一种重要的生物催化剂.采用基因挖掘技术,在基因组数据库中获得一个来自伯克氏菌Burkholderia phytofirmans PsJN的ω-转氨酶基因(hbp),将该基因在大肠杆菌BL21(DE3)中克隆、表达,利用镍柱亲和层析将该酶(HBP)进行纯化并研究了其酶学性质和底物谱.结果表明,以p-苯丙氨酸(p-Phe)为氨基供体、丙酮酸为氨基受体,HBP具有较高的活力(33.80 U/mg)和立体选择性;其最适温度为40℃左右,最适pH在8.0-8.5之间.研究过程中,建立了一种简便快捷的紫外吸收法来检测β-Phe的脱氨反应,证明了该反应的热力学平衡性质.底物谱研究表明HBP可以以β-Phe及其衍生物为氨基供体.结果表明HBP能够有效地手性拆分rac-p-Phe及其衍生物,转化率在50％左右,ee＞99％.